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公司動態
GB 4789.5-2012 標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗
2012-07-13
前食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗
1、范圍
本標準規定了食品中志賀 本標準規定了食品中志賀 本標準規定了食品中志賀 本標準規定了食品中志賀 本標準規定了食品中志賀 氏菌(Shigella Shigella ShigellaShigella)的檢驗方法。 的檢驗方法。 的檢驗方法。 的檢驗方法。GB 4789.5-2012 本標準適用于食品中志賀 本標準適用于食品中志賀 本標準適用于食品中志賀 本標準適用于食品中志賀 本標準適用于食品中志賀 氏菌的檢驗。 菌的檢驗。 菌的檢驗。

2、設備和材料
除微生物 除微生物 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下: 實驗室常規滅菌及培養設備外,其他和材料如下:
a) 恒溫培養箱: 恒溫培養箱: 恒溫培養箱: 恒溫培養箱: 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ ;
b) 冰箱: 冰箱: 2 ℃ ~5 ℃ 5 ℃ ;
c) 膜過濾系統; 膜過濾系統; 膜過濾系統; 膜過濾系統;
d) 厭氧培養裝置: 厭氧培養裝置: 厭氧培養裝置: 厭氧培養裝置: 41.5 41.5 ℃1 ℃;
e) 電子 天平:感量 天平:感量 天平:感量 天平:感量 0.1 g 0.1 g0.1 g;
f) 顯微鏡: 顯微鏡: 顯微鏡: 10 ×~100 ×;
g) 均質器 均質器 ;
h) 振蕩器 振蕩器 ;
i) 無菌吸管: 無菌吸管: 無菌吸管: 1 mL (具 0.01 mL 0.01 mL刻度)、 刻度)、 刻度)、 10 mL 10 mL (具 0.1 mL 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸頭 刻度)或微量移液器及吸頭 刻度)或微量移液器及吸頭 刻度)或微量移液器及吸頭 刻度)或微量移液器及吸頭 刻度)或微量移液器及吸頭 ;
j) 無菌 均質杯 均質杯 或無菌 或無菌 均質袋 均質袋 :容量 500 mL 00 mL ;
k) 無菌培養皿:直徑 無菌培養皿:直徑 無菌培養皿:直徑 無菌培養皿:直徑 無菌培養皿:直徑 90 mm90 mm90 mm ;
l) pH 計或 pH 比色管或精密 比色管或精密 比色管或精密 pH 試紙 ;
m) 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。 全自動微生物化鑒定系統。
3 培養基和試劑
3.1 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 -新生霉素 :見附錄A 中A.1A.1 。
3.2 麥康凱( 麥康凱( 麥康凱( MACMACMAC)瓊脂: )瓊脂: )瓊脂: 見附錄A 中A.2。
3.3 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( 木糖賴氨酸脫氧膽鹽( XLDXLDXLD)瓊脂: )瓊脂: 見附錄A 中A.3。
3.4 志賀氏菌顯色培養基。 志賀氏菌顯色培養基。 志賀氏菌顯色培養基。 志賀氏菌顯色培養基。 志賀氏菌顯色培養基。 志賀氏菌顯色培養基。
3.5 三糖鐵( 三糖鐵( 三糖鐵( TSITSI )瓊脂 :見附錄A 中A.4。
3.6 營養瓊脂斜面: 營養瓊脂斜面: 營養瓊脂斜面: 營養瓊脂斜面: 見附錄A 中A.5。
3.7 半固體瓊脂 半固體瓊脂 半固體瓊脂 :見附錄A 中A.6A.6 。
3.8 葡萄糖銨培養基: 葡萄糖銨培養基: 葡萄糖銨培養基: 葡萄糖銨培養基: 葡萄糖銨培養基: 見附錄A 中A.7A.7 。
3.9 尿素瓊脂: 尿素瓊脂: 尿素瓊脂: 見附錄A 中A.8A.8 。
3.10 β-半乳糖苷酶培養基: 乳糖苷酶培養基: 乳糖苷酶培養基: 乳糖苷酶培養基: 乳糖苷酶培養基: 見附錄A 中A.9A.9 。
3.11 氨基酸脫羧酶試驗培養: 氨基酸脫羧酶試驗培養: 氨基酸脫羧酶試驗培養: 氨基酸脫羧酶試驗培養: 氨基酸脫羧酶試驗培養: 氨基酸脫羧酶試驗培養: 見附錄A 中A.10A.10 。
3.12 糖發酵管: 糖發酵管: 糖發酵管: 見附錄A 中A.11A.11 A.11。
3.13 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 西蒙氏檸檬酸鹽培養基 :見附錄A 中A.12A.12 A.12。
3.14 粘液酸鹽培養基: 粘液酸鹽培養基: 粘液酸鹽培養基: 粘液酸鹽培養基: 見附錄A 中A. 13A. 13 。
3.15 蛋白胨水、靛基質試劑: 蛋白胨水、靛基質試劑: 蛋白胨水、靛基質試劑: 蛋白胨水、靛基質試劑: 蛋白胨水、靛基質試劑: 蛋白胨水、靛基質試劑: 見附錄A 中A.14A.14 A.14。
3.16 志賀氏菌屬診斷血清。 志賀氏菌屬診斷血清。 志賀氏菌屬診斷血清。 志賀氏菌屬診斷血清。 志賀氏菌屬診斷血清。 志賀氏菌屬診斷血清。
3.17 生化鑒定試劑盒。 生化鑒定試劑盒。 生化鑒定試劑盒。 生化鑒定試劑盒。
4 檢驗程序 檢驗程序
志賀氏菌檢驗程序見圖 志賀氏菌檢驗程序見圖 志賀氏菌檢驗程序見圖 志賀氏菌檢驗程序見圖 志賀氏菌檢驗程序見圖 1。

圖 1 志賀氏菌檢驗程序 志賀氏菌檢驗程序 志賀氏菌檢驗程序 志賀氏菌檢驗程序
5 操作步驟
5.1 增菌
以無菌操作 以無菌操作 取檢 樣 25 g(mL ),加入裝有滅菌 加入裝有滅菌 225 mL 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 的均質杯, 均質杯, 用旋轉刀片式均 用旋轉刀片式均 用旋轉刀片式均 用旋轉刀片式均 質器以 質器以 8 000 r/min 8 000 r/min 8 000 r/min8 000 r/min8 000 r/min8 000 r/min~10 000 r/min 10 000 r/min 10 000 r/min10 000 r/min10 000 r/min10 000 r/min均質;或 均質;或 加入裝有 加入裝有 加入裝有 225225 mL 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 的均質袋中,用 均質袋中,用 均質袋中,用 均質袋中,用 拍擊式均質 拍擊式均質 拍擊式均質 拍擊式均質 器連續均質 連續均質 連續均質 1 min 1 min1 min~2 min 2 min2 min,液體樣品振蕩混勻即可。 ,液體樣品振蕩混勻即可。 ,液體樣品振蕩混勻即可。 ,液體樣品振蕩混勻即可。 ,液體樣品振蕩混勻即可。 ,液體樣品振蕩混勻即可。 于 41.5 41.5 ℃±1℃,厭 氧培養 氧培養 16 h16 h ~20 h 。
5.2 分離
取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 取增菌后的志賀氏液分別劃線接種于 XLDXLDXLD瓊脂平板和 瓊脂平板和 MACMACMAC瓊脂平板或 瓊脂平板或 瓊脂平板或 志賀氏菌顯色培養基平板上,于 36 ℃1 ℃培養20 h~24 h,觀察各個平板上生長的菌落形態。宋內氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現的菌落不典型或菌落較小不易觀察,則繼續培養至48 h再進行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。
36 ℃±1 ℃,20 h20 h20 h20 h~48 h48 h48 h48 h
XLDXLDXLD
挑取可疑菌落 挑取可疑菌落 挑取可疑菌落
TSI TSI,半固體 半固體 ,
營養瓊脂斜面 營養瓊脂斜面 營養瓊脂斜面
MAC MAC或志賀氏菌顯色培養基 或志賀氏菌顯色培養基 或志賀氏菌顯色培養基 或志賀氏菌顯色培養基 或志賀氏菌顯色培養基 或志賀氏菌顯色培養基
生化鑒定 生化鑒定
報告
血清學分型 血清學分型
志賀氏菌屬分群及型結果 志賀氏菌屬分群及型結果 志賀氏菌屬分群及型結果 志賀氏菌屬分群及型結果 志賀氏菌屬分群及型結果 志賀氏菌屬分群及型結果
檢樣
25 g (或 25 mL 25 mL 25 mL)樣品 +志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 志賀氏菌增肉湯 225 mL 225 mL
41.5 41.5 41.5 41.5 41.5 ℃± ℃±1℃,
16 h16 h16 h16 h~20 h20 h20 h20 h厭氧培養
GB 4789.5-2012
5
表 1 1 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征 志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的落特征
選擇性瓊脂平板
志賀氏菌的落特征
MACMACMAC瓊脂
無色至淺粉紅,半透明、光滑濕潤圓形邊緣整齊
或不XLDXLDXLD瓊脂
粉紅色至無,半透明、光滑濕潤圓形邊緣整齊
或不志賀氏菌顯色培養基
按照顯色培養基的說明進行判定
5.3 初步 生化試驗 生化試驗 生化試驗
5.3.1 自選擇性瓊脂平板上分別挑 自選擇性瓊脂平板上分別挑 自選擇性瓊脂平板上分別挑 自選擇性瓊脂平板上分別挑 自選擇性瓊脂平板上分別挑 自選擇性瓊脂平板上分別挑 取2個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 個以上典型或可疑菌落,分別接種 TSI TSI、半固體和營養瓊脂斜面各一 和營養瓊脂斜面各一 和營養瓊脂斜面各一 和營養瓊脂斜面各一 和營養瓊脂斜面各一 管,置 36 ℃1 ℃培養20 h~24 h,分別觀察結果。
5.3.2 凡是三糖鐵瓊脂中斜面產堿、底層產酸(發酵葡萄糖,不發酵乳糖,蔗糖)、不產氣(福氏志賀氏菌6型可產生少量氣體)、不產硫化氫、半固體管中無動力的菌株,挑取其5.3.1 5.3.1 5.3.1中已培養的營養 瓊脂斜面上生長的菌苔,進行生化試驗和血清學分型。
5.4 生化試驗及附加生化試驗
5.4.1生化試驗
用 5.3.1 5.3.1中已培養的 已培養的 營養 瓊脂斜面上生長的菌苔, 瓊脂斜面上生長的菌苔, 瓊脂斜面上生長的菌苔, 瓊脂斜面上生長的菌苔, 瓊脂斜面上生長的菌苔, 瓊脂斜面上生長的菌苔, 進行生化試驗 進行生化試驗 進行生化試驗 ,即 β-半乳糖苷酶 半乳糖苷酶 、尿素 、賴氨酸脫 賴氨酸脫 賴氨酸脫 羧酶 、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉的分解試驗。除宋內氏志賀菌 、鮑13 型的鳥 型的鳥 氨酸 陽性 ;宋內氏菌 宋內氏菌 宋內氏菌 和痢疾志賀氏菌 和痢疾志賀氏菌 和痢疾志賀氏菌 和痢疾志賀氏菌 1型,鮑氏志賀菌 型,鮑氏志賀菌 型,鮑氏志賀菌 型,鮑氏志賀菌 型,鮑氏志賀菌 13 型的 β-半乳糖苷酶為陽性以外 半乳糖苷酶為陽性以外 半乳糖苷酶為陽性以外 半乳糖苷酶為陽性以外 半乳糖苷酶為陽性以外 ,其余生化試驗志賀 ,其余生化試驗志賀 ,其余生化試驗志賀 ,其余生化試驗志賀 ,其余生化試驗志賀 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 氏菌屬的培養物均為陰性結果。另外 由于福氏志賀菌 由于福氏志賀菌 由于福氏志賀菌 由于福氏志賀菌 由于福氏志賀菌 6型的 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑相 似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗似, 必要時還需加做靛基質、甘露醇棉子糖油試驗也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為也可做革蘭氏染色檢查和氧 化酶試驗,應為化酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 酶陰性的革蘭氏桿菌。生化反應不符合株 ,即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集,仍不得 判定為志賀氏菌屬 判定為志賀氏菌屬 判定為志賀氏菌屬 判定為志賀氏菌屬 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 。志賀氏菌屬生化特性見表 2。
表 2 志賀 氏菌屬四個群的生化特征 菌屬四個群的生化特征 菌屬四個群的生化特征 菌屬四個群的生化特征 菌屬四個群的生化特征 菌屬四個群的生化特征
生化反應
A群:痢疾志賀氏菌
B群:福氏志賀菌
C群: 鮑氏志賀菌
D群:宋內氏志賀菌
ß-半乳糖苷酶
a痢疾志賀 1型和鮑氏 型和鮑氏 13 型為陽性 型為陽性 。
b鮑氏 13 型為鳥氨酸陽 性。
c福氏 4型和 6型常見甘露醇陰性變種 型常見甘露醇陰性變種 。
5.4.2附加生化實驗
由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( 由于某些不活潑的大腸埃希氏菌( anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col i)、 A-D(AlkalescensAlkalescensAlkalescens Alkalescens Alkalescens -D isparbiotypesD isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypesD isparbiotypes 堿性 -異型) 菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合菌的部分生化特征與志賀 氏相似,并能某種型血清發凝集;因此前面實驗符合氏菌屬生化特性的培養物還需 氏菌屬生化特性的培養物還需 氏菌屬生化特性的培養物還需 氏菌屬生化特性的培養物還需 氏菌屬生化特性的培養物還需 氏菌屬生化特性的培養物還需 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 、西蒙氏檸檬酸鹽粘液試驗 (36 ℃培養 24 h 24 h ~48 h )。志 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 賀氏菌屬和不活潑大腸埃希、 A-D菌的生化特性區別 菌的生化特性區別 菌的生化特性區別 菌的生化特性區別 見表 3。
GB 4789.5-2012
6
表 3 志賀 氏菌屬和不活潑 菌屬和不活潑 菌屬和不活潑 菌屬和不活潑 大腸埃希氏菌 大腸埃希氏菌 大腸埃希氏菌 、A-D菌的生化特性區別 菌的生化特性區別 菌的生化特性區別 菌的生化特性區別
生化反應
A群:痢疾
志賀氏菌
B群:福氏
志賀氏菌
C群:鮑氏
志賀氏菌
D群:宋內氏
志賀氏菌
大腸埃希氏菌
A-D菌
5.4.3 如選擇 如選擇 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定試劑盒或全自動微物 生化鑒定系統 生化鑒定系統 生化鑒定系統 ,可根據 ,可根據 ,可根據 5.3.2 5.3.2的初步判斷結果,用 的初步判斷結果,用 的初步判斷結果,用 的初步判斷結果,用 的初步判斷結果,用 5.3.1 5.3.1中已培 中已培 養的營瓊脂斜面 養的營瓊脂斜面 養的營瓊脂斜面 養的營瓊脂斜面 上生長的菌苔 上生長的菌苔 上生長的菌苔 ,使用 ,使用 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 生化鑒定試劑盒或全自動微物系統 進行鑒定。 進行鑒定。 進行鑒定。
5.5 血清學鑒定 血清學鑒定 血清學鑒定
5.5.1 抗原的準備 抗原的準備 抗原的準備
志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以志賀氏菌屬沒有 動力,所以鞭毛抗原 鞭毛抗原 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( 。志賀氏菌屬主要有體( O)抗原。菌體 )抗原。菌體 )抗原。菌體 )抗原。菌體 )抗原。菌體 O抗原又可分為 抗原又可分為 抗原又可分為 抗原又可分為 型和群的特異性抗原。 型和群的特異性抗原。 型和群的特異性抗原。 型和群的特異性抗原。 型和群的特異性抗原。
一般采用 一般采用 1.2 1.2%~1.5% 瓊脂 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。 培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。
注 1:一些志賀氏菌如果因 為 K抗原的存在而不出現凝集反應時,可挑取菌苔于 1 mL 生理鹽水做成濃菌液, 生理鹽水做成濃菌液, 100 ℃煮 沸 15 min15 min15 min15 min15 min ~60 min60 min60 min60 min60 min 去除 K抗原后再檢查。 原后再檢查。
注 2:D群志賀氏菌既可能是光滑型株也粗糙,與其他抗原不 存在交叉反應。腸桿科群志賀氏菌既可能是光滑型株也粗糙,與其他抗原不 存在交叉反應。腸桿科群志賀氏菌既可能是光滑型株也粗糙,與其他抗原不 存在交叉反應。腸桿科群志賀氏菌既可能是光滑型株也粗糙,與其他抗原不 存在交叉反應。腸桿科同,宋內氏志賀菌粗糙型株不一定會自凝。沒有 K抗原。
5.5.2 凝集反應 凝集反應
在玻片上劃出 在玻片上劃出 在玻片上劃出 2個約 1cm×2cm 1cm×2cm1cm×2cm 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 的區域,挑取一環待測菌各放 1/2 1/2環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 環于玻片上的每一區域部,在其 中一個區域下部加 中一個區域下部加 中一個區域下部加 中一個區域下部加 1滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 滴抗血清,在另一區域下部加入 1滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。玻片傾斜搖動混合 1 min 1 min1 min,并對著黑色背景進行觀察, , 并對著黑色背景進行觀察, 并對著黑色背景進行觀察, 并對著黑色背景進行觀察, 并對著黑色背景進行觀察, 并對著黑色背景進行觀察如果抗血清 如果抗血清 如果抗血清 中出現凝結成塊的顆粒 中出現凝結成塊的顆粒 中出現凝結成塊的顆粒 中出現凝結成塊的顆粒 中出現凝結成塊的顆粒 ,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出,而且生理鹽水中沒有發自凝現 象那么集反應為陽性。如果出凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。 這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗凝集,視作為自。
這時應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗如果 待測菌的 待測菌的 待測菌的 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 生化特征符合志賀氏菌屬,而其血清學試驗為陰性的話則按 5.5.1 5.5.1 注 1進行 試驗。
5.5.3 血清學分型(選做項目) 血清學分型(選做項目) 血清學分型(選做項目) 血清學分型(選做項目) 血清學分型(選做項目)
先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。先用 四種志賀氏菌多價血清檢查,如果呈現凝集則再相應各群分別試驗。B群福氏 群福氏 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 志賀氏菌多價血清進行實驗,如呈現凝集再用其群和型因子分別檢查 。如果 B群多價血清不凝集, 群多價血清不凝集, 群多價血清不凝集, 群多價血清不凝集, 群多價血清不凝集, 則用 D群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 群宋內氏志賀菌血清進行實驗,如呈現凝集則用其 Ⅰ相和Ⅱ相血清檢查;如果 血清檢查;如果 血清檢查;如果 血清檢查;如果 血清檢查;如果 B、D群多價血 群多價血 群多價血 清都不凝集,則用 清都不凝集,則用 清都不凝集,則用 清都不凝集,則用 A群痢疾志賀氏菌多價血清及 群痢疾志賀氏菌多價血清及 群痢疾志賀氏菌多價血清及 群痢疾志賀氏菌多價血清及 群痢疾志賀氏菌多價血清及 群痢疾志賀氏菌多價血清及 1~12 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 各型因子血清檢查,如果上述三種多價都不凝 集,可用 集,可用 集,可用 C群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 群鮑氏志賀菌多價檢查,并進一步用 1~18 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 各型因子血清檢查。福氏志賀菌和亞的 型抗原 和群抗原鑒別見表 和群抗原鑒別見表 和群抗原鑒別見表 和群抗原鑒別見表 和群抗原鑒別見表 4。關于更多標準請放主頁二星和值规律
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